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ELISA實驗中標曲和樣本的顯色問題
更新時間:2025-06-20瀏覽:192次

  ELISA實驗中標曲和樣本的顯色問題

  以下是天津本生ELISA實驗中關(guān)于 ?標曲和樣本顯色問題? 的常見原因及解決方案,綜合多篇文獻分析整理:

  一、標曲不顯色或顯色弱,樣本正常

  標準品溶解不充分?

  溶解時未渦旋震蕩,導致標準品未溶解或稀釋不均。

  解決?:使用渦旋震蕩器充分混勻標準品及稀釋液。

  孵育條件不當?

  靜置孵育導致抗原抗體接觸不充分,建議使用微孔板振蕩器(37℃)。

  試劑漏加或失效?

  可能漏加檢測抗體、酶標試劑,或試劑因反復凍融失活。

  解決?:分裝保存試劑,操作時標記步驟避免遺漏。


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  二、標曲和樣本均不顯色

  系統(tǒng)性問題?

  酶標試劑(如HRP)失活、底物(TMB)污染或過期。

  解決?:更換新鮮底物,檢查試劑保存條件(避光、防潮)。

  操作失誤?

  未按說明書步驟操作(如漏加關(guān)鍵組分)。

  解決?:嚴格遵循操作流程,新手建議使用帶染料的試劑盒輔助驗證。

  三、標曲顯色正常,樣本不顯色

  樣本濃度過低?

  目標蛋白濃度低于檢測限,或樣本類型(如血漿、細胞上清)不匹配。

  解決?:嘗試高敏ELISA試劑盒或濃縮樣本。

  樣本干擾物質(zhì)?

  溶血、細菌污染、類風濕因子等導致假陰性。

  解決?:離心去除雜質(zhì),添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本。

  四、顯色過強或無梯度

  洗滌不凈

  殘留HRP酶催化底物過度顯色,尤其是TMB前最后一次洗滌。

  解決?:確保洗液注滿孔,拍干液體,手動洗板時更換吸水紙。

  底物孵育時間過長?

  TMB顯色超過15分鐘可能導致OD值飽和。

  解決?:顯色10-15分鐘后及時終止(最高濃度孔出現(xiàn)深藍色即可)。

  五、其他注意事項

  移液精度?:定期校準移液器,避免加樣誤差。

  環(huán)境控制?:避免底物(TMB)提前氧化(如避光保存)。

  對照設置?:陰陽性對照可幫助區(qū)分系統(tǒng)誤差與樣本問題。

  通過規(guī)范操作和針對性排查,可顯著改善顯色異常問題。

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據(jù),具體請咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應商。

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