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小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)
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  貨號(hào):BS-9406 小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒

  一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

  ?試劑盒保存與平衡?:試劑盒應(yīng)保存在2-8℃條件下,使用前需室溫平衡20分鐘?。

  ?實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備?:準(zhǔn)備必要的實(shí)驗(yàn)器材,如酶標(biāo)儀(450nm)、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱等?。

  二、樣本收集與處理

  ?血清?:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清和紅細(xì)胞?。

  ?血漿?:采用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清?。

  ?細(xì)胞上清液?:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物?1。

  ?組織勻漿?:將組織加入適量生理鹽水搗碎,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。若樣本不及時(shí)檢測(cè),應(yīng)按一次用量分裝并凍存于-20℃?。

  三、實(shí)驗(yàn)步驟

  ?加樣?:

  在酶標(biāo)包被板上設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔和空白孔。

  標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn),每個(gè)濃度設(shè)定平行孔,加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。

  待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40微升,再加待測(cè)樣品10微升(最終稀釋度為5倍)。

  空白孔加入50微升蒸餾水?。

  ?溫育?:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?。

  ?配液?:將濃縮洗滌液按倍數(shù)稀釋后備用?。

  ?洗滌?:揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)5次,拍干?。

  ?加酶?:每孔(除空白孔外)加入酶標(biāo)試劑50微升?。

  ?再次溫育?:操作同第一次溫育步驟?。

  ?再次洗滌?:操作同洗滌步驟?。

  ?顯色?:每孔先加入顯色劑A50微升,再加入顯色劑B50微升,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘?。

  ?終止?:每孔加終止液50微升,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃)?。

  ?測(cè)定?:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行?。

  四、注意事項(xiàng)

  試劑盒僅用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷?。

  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封并低溫干燥保存?。

  嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,避免交叉污染和試劑浪費(fèi)?3。

  五、實(shí)驗(yàn)室自備器材試劑

  96孔讀板儀器

  自動(dòng)洗板機(jī)

  移液器和槍頭(建議使用多通道移液器/排槍)

  Eppendorf管

  洗板緩沖液(如neutral PBS或TBS,試劑盒內(nèi)提供足量,如需額外緩沖液可參考配方配制)?4請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作,以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

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